更新時間：2025-06-11
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成功的實驗是一個循序漸進(jìn)的過程，影響ELISA實驗結(jié)果的因素有很多，只有一一的掌握了實驗的細(xì)節(jié)，才能夠做出wan美的實驗，我司葉技術(shù)員總結(jié)ELISA試劑盒實驗失敗的原因：
一、標(biāo)本的影響
溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)（紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），在洗滌過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧（O），從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，產(chǎn)生假陽性。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。
二、標(biāo)本受細(xì)菌污染
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
三、標(biāo)本保存不當(dāng)
在冰箱中保存過久的標(biāo)本，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、造成假陽性；為克服上述干擾，ELISA試劑盒測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時應(yīng)輕柔，不可強烈振蕩。
四、標(biāo)本凝固不全
植物抗壞血酸氧化酶（AO）elisa試劑盒在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
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