ELISA試劑盒實驗沒有檢測到陽性信號的原因?
可能原因有
①一抗和二抗不匹配
②沒有足夠的一抗和二抗來結合目標蛋白
③封閉劑與一抗或二抗有交叉反應
④一抗不識別待檢物種蛋白
⑤抗原量不足
⑥組織中目的蛋白含量低
⑦轉膜不充分
⑧洗膜過度
⑨過度封閉使目標蛋白不能顯色
⑩一抗失效
相應的處理辦法分別是
①保證二抗與一抗宿主物種相同(如一抗來自小鼠，二抗須為抗小鼠抗體)
②使用高濃度抗體，4℃延長孵育時間(如過夜)
③使用溫和的去污劑如吐溫-20或更換封閉劑(脫脂奶粉、BSA、明膠等)
④參照況明書，比對免疫原序列和蛋白序列以確保抗體和目的蛋白會發生反應，設置陽性對照
⑤保證每條泳道蛋白上樣量不低于20-30μg，使用蛋白酶抑制劑并設置陽性對照
⑥ 濃縮樣本使信號zui大化
⑦使用可逆染色劑如立春紅S檢測轉膜結果，檢查轉膜操作是否正確
⑧適度洗膜
⑨預實驗選擇合適的封閉劑或縮短封閉時間
⑩使用新鮮抗體，重復使用有效濃度會降低?
上海通蔚生物科技有限公司
地址：上海市金山區楓涇鎮環東一路65弄2號3463室
主營產品：酶聯免疫試劑盒，食品農殘檢測，細胞系，培養基，胎牛血清
©2019 版權所有：上海通蔚生物科技有限公司 備案號：滬ICP備14033764號-3 總訪問量：1304057 站點地圖 技術支持：環保在線 管理登陸