關(guān)于ELISA試劑盒的每一步都要注意才行。 ELISA試劑盒加樣時(shí)的防錯(cuò)小經(jīng)驗(yàn) （1）用一張寫滿字的紙，字越多越好，比如報(bào)紙，墊在下面，這樣，加過(guò)標(biāo)本的小孔看過(guò)去下面的字會(huì)變小，沒(méi)加的字正常，非常容易區(qū)分。 （2）可以利用液面反光與沒(méi)有加的孔加以區(qū)別 （3）在標(biāo)本加完后，再把加樣槍全壓下，使液面產(chǎn)生小氣泡，也可以加以區(qū)分 3、棋盤試驗(yàn)的操作方法： （1）將抗原按一定的梯度倍比稀釋后，按照ELISA從上到下（或者從左到右）的順序包被。 （2）將抗體按一定的梯度倍比稀釋后按照ELISA試劑盒從左到右或者從上到下加入。 （3）二抗的稀釋倍數(shù)是一定的，然后顯色，讀值。 OD值的測(cè)定時(shí)，波長(zhǎng)要根據(jù)顯色劑的不同而定，一般上大家都使用TMB顯色，450nm讀值。根據(jù)讀值得結(jié)果可以選定合適的抗原和抗體效價(jià)，這就是棋盤 實(shí)驗(yàn)的目的，如果抗原包被量已知而二抗的工作濃度不確定的話就用一抗和二抗作棋盤試驗(yàn)。
注意事項(xiàng)
1．ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，ELISA試劑盒以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存。
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