ELISA試劑盒抗原的免疫原性，首先決定于其自身的化學特性，但同一種抗原，對不同種動物或同種動物不同個體間其免疫原性強弱，可表現很大差異，因此一種抗原的免疫原性是由其化學性質和宿主因素決定的。具有免疫原性的物質稱為免疫原（immunogen）。
一、ELISA試劑盒免疫原性的化學基礎
許多天然物質可誘導免疫應答，其中大分子蛋白質和多糖具有強免疫原性，小分子多肽及核酸也具有免疫原性。
（一）化學組成
大分子蛋白質，分子量大于10000者，可含有大量不同的抗原決定簇，是zui強的免疫原。如異種血清蛋白、酶蛋白及細菌毒等，是強免疫原蛋白質的例子。
多糖是重要的天然抗原，純化多糖或糖蛋白、脂蛋白以及糖脂蛋白等復合物中的糖分子部分都具有免疫原性。在自然界，許多微生物有富含多糖的莢膜或胞壁，細菌內毒素是脂多糖，以及一些血型抗原（A、B、C、H）也是多糖。
核酸分子多無免疫原性，但如與蛋白質結合形成為核蛋白則有免疫原性。在自身免疫病中，可見對天然核蛋白誘導的免疫應答產生的抗DNA或RNA抗體。
此外，多肽類激素如胰島素雖為小分子量（6000）亦具有免疫原性。來自一種動物的胰島素，如長期用于另一種動物，亦能誘導免疫應答產生抗體。
（二）ELISA試劑盒分子量
凡具有免疫原性的物質，其分子量都較大，一般在1萬以上，小于1萬者呈弱免疫原性，低于4000者一般不具有免疫原性。許多小的免疫性原性分子可激發細胞免疫，而不產生抗體。亦有大分子量物質，如明膠分子量可達10萬，但因其為直鏈氨基酸結構，易在體內降解為低分子物質，所以呈弱免疫原性。可見免疫原性除與分子量有關外，還與其化學結構相關。
（三）ELISA試劑盒化學結構
在蛋白質分子中，凡含有大量芳香族氨基酸，尤其是含有酷氨酸的蛋白質，其免疫原性強；而以非芳香族氨基酸為主的蛋白質，其免疫原性較弱。蛋白質和多糖抗原，凡結構復雜者免疫原性強，反之則較弱。其復雜性是由氨基酸和單糖的類型及數量等決定的。如聚合體蛋白質分子較單體可溶性蛋白質分子的免疫原性強。
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