正常情況下，機體的血液是無菌的，如果檢出細菌（排除污染）即有確診意義。葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌、大腸埃希菌、沙門菌、變形桿菌、銅綠假單胞菌和厭氧菌等均可引起菌血癥、敗血癥和膿毒血癥。對臨床表現酷似敗血癥而普通培養呈陰性者，應注意厭氧菌或L型菌感染的可能性。
【材料】
1、可疑敗血癥患者血標本。
2、肉湯、血瓊脂平板。
3、人血漿或兔血漿。
4、0.9%氯化鈉溶液、載玻片等。
【操作】
一、血標本的采取
1、盡可能于疾病早期、高熱期（陽性率zui高）、抗菌藥物治療前采血，并注意以無菌操作技術采集標本，并盡快送檢。
2、如已用過抗菌藥物，應在化驗單上注明使用過何種抗菌藥物，以便有關檢驗人員在進行細菌培養時作適當處理。例如用過青霉素的，則應在培養液內加入青霉素酶；用過鏈霉素的，則應加入胱氨酸；用過磺胺的，則應加入對氨基苯甲酸；用過四環素族、多黏菌素、鏈霉素等的，可加入0.3%硫酸鎂，以消除藥物對細菌的抑制作用，提高陽性率。
3、無菌操作采取靜脈血3—5ml，立即注入含30—50ml肉湯培養液的培養瓶中搖勻，以防血液凝固。因為血液中含抗體和補體等抗菌物質，所以血液和肉湯培養液的比例一般以1：10為宜。如果血液過多，抗菌物質未被充分稀釋，會影響細菌的生長繁殖；血液過少則細菌數量也少，兩者均會影響細菌檢出的陽性率。
4、凡疑為厭氧菌引起的敗血癥時，應按厭氧培養程序對細菌進行分離培養鑒定。血液中因含菌數較少，一般不作直接涂片鏡檢，首先接種在液體培養液中進行增菌，然后再進行分離鑒定。
二、鑒定程序
三、操作
1、增菌及分純
（1）將已接種血標本的肉湯培養液置37℃培養，逐日觀察，連續9天。無菌生長者則肉湯呈清亮，血液呈鮮紅色沉于瓶底（如增菌培養結果為液體培養液外觀清亮，應在培養7天后，作盲目轉種血平板，血平板經培養后仍無菌生長者，方可報告為無菌生長）；有細菌生長，則可出現肉湯混濁、顆粒狀沉淀、菌膜、凝胨、色素產生、血液變為暗紅玫瑰色等現象。
（2）如增菌培養液中有菌生長，則用無菌接種環挑取肉湯培養液之底部沉淀，劃線接種于血平板上，置37℃培養18—24h小時。
2、形態學初步鑒定：觀察血平板上菌落特征，取菌落涂片作革蘭染色鏡檢，根據菌落特點，結合染色結果得出初步鑒定結論。
3、生化鑒定
（1）觸酶實驗（過氧化氫酶實驗）：用接種環挑取固體培養液上的菌落，置于潔凈的試管內或玻片上，然后滴加3%過氧化氫溶液數滴，觀察結果。
結果判定：于半分鐘內有大量氣泡產生者為陽性，不產生氣泡者為陰性。
絕大多數細菌均產生過氧化氫酶，但鏈球菌屬的細菌其觸酶實驗 陰性。故常用此實驗來鑒別葡萄球菌和鏈球菌。此實驗不宜用血平板上的菌落，因紅細胞內含有血紅素，而血紅素具有過氧化氫酶活性，故紅細胞可導致觸酶實驗假陽性。此外，在陳舊培養物上細菌可失去觸酶活性。
（2）葡萄球菌凝固酶實驗：葡萄球菌凝固酶一般是由致病性葡萄球菌產生的一種能使枸櫞酸鈉或肝素抗凝的人或兔血漿發生凝固的酶類物質。血漿凝固酶實驗被廣泛用于常規鑒別金葡萄球菌與其他葡萄球菌，是致病性葡萄球菌的一個主要鑒定依據。
（3）耐熱脫氧核糖核酸酶實驗：致病性葡萄球菌產生一種耐熱的DNA酶，能分解DNA。非致病葡萄球菌雖也能產生DNA酶，但不耐熱。因此，耐熱DNA酶測定可作為鑒定致病性葡萄球菌的一個重要指標。
（4）甘露醇發酵實驗：將金葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌分別接種于甘露醇發酵管，其上覆蓋無菌液體石蠟油，37℃孵育18—24h小時觀察結果。致病性的葡萄球菌多能發酵甘露醇產酸，而非致病性的葡萄球菌如表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌均不能發酵甘露醇。
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