操作步驟
1、將1個McAb與固相載體連接，形成固相McAb。人ELISA試劑盒洗滌除去未結合物。
2、同時加入待檢標本和酶標McAb，溫育，是待檢抗原和固相McAb及酶標McAb反應形成雙抗體夾心復合物。洗滌除去未結合物。
3、加底物顯色。
適用于雙抗體夾心法的人ELISA試劑盒，有些也可用雙位點一步法檢測。如HBsAg同樣可用此法進行檢測，其原理為：將純化的抗HBs吸附于固相載體表面，加入待檢血清(或血漿)，同時加入辣根過氧化物酶標記的另一個抗HBs(酶結合物)，如血清或血漿中含有HBsAg，則通過溫育形成固相McAb-HBsAg-酶標McAb復合物，加入底物，通過顯色反應進行測定。若血清或血漿中不含HBsAg，通過洗滌除去未結合物，
加底物后就不顯色。
1.吸取液體時速度不易太快，以免產生氣泡，吸取的量不夠準確。
2.液體全部加入酶標孔后，將酶標板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應。
3.孵育時要使蓋板膜封好酶標板，防止水分蒸發，以防曲線不成線性。
4.由于底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。
5.手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置15～30s，不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。
6.吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。
7.檢測吸光度前應將酶標儀打開，將其預熱30min以上。
8.底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性，應盡量避免接觸皮膚。
9.要確保微量加樣器的準確性，可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質，人ELISA試劑盒溫度環境為20%左右時，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應該將其zui高量程和zui低量程進行確定。
10.要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數據的準確性，又能反映出試劑盒的精密度。
11.對樣本的結果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。
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