我們?cè)谟肊LISA顯色法測(cè)定乙肝五項(xiàng)的過(guò)程中，會(huì)不同程度出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果。經(jīng)過(guò)觀察與分析，總結(jié)了ELISA法測(cè)定乙肝五項(xiàng)中出現(xiàn)假陽(yáng)性的幾種原因，來(lái)與科研工作者進(jìn)行分享和探討，以便在未來(lái)工作中避免出現(xiàn)錯(cuò)誤，提高我們的實(shí)驗(yàn)效率和水平。
在一次檢測(cè)試驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)所做乙肝五項(xiàng)的反應(yīng)板都呈現(xiàn)藍(lán)色，經(jīng)過(guò)仔細(xì)查找原因，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，操作中將待顯色的反應(yīng)板置于6%“84”消毒液剛擦拭過(guò)的桌面上，會(huì)使其反應(yīng)結(jié)果均顯藍(lán)色。為進(jìn)一步證實(shí)，我們便做了以下試驗(yàn)。
1 材料
1.1 “84”消毒液購(gòu)自上海利康消毒高科技有限公司。
1.2 乙肝五項(xiàng)ELISA試劑盒購(gòu)自上海信然生物有限公司。
2 方法與結(jié)果
2.1 方法
將已知的HBsAg陽(yáng)性、陰性和弱陽(yáng)性的血清操作至顯色時(shí)，分為6組，分別于1min、5min、10min、15min、20min、25min加上顯色劑后，置于用6%“84”消毒液擦試過(guò)的桌面上（桌面上無(wú)明水，但有濕度）放置15min至25min觀察結(jié)果。當(dāng)20min過(guò)后，我們發(fā)現(xiàn)，其結(jié)果均呈藍(lán)色。
2.2 結(jié)果
將已知的HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本操作至加顯色劑后分別加入不同濃度“84”消毒液5μl。隨“84”消毒液濃度減少其顯色逐漸呈:黃綠、棕紅、淡藍(lán)、藍(lán)色，至0.001%濃度無(wú)顏色改變。
3 討論
我們所用ELISA法中的“B”顯色劑，主要成份是四甲基聯(lián)苯胺（TMB），而酶標(biāo)記物中的酶為辣根過(guò)氧化物酶。“84消毒液的主要成份為要效氯，分解后的游離氯能取代ELISA顯色劑B液（TMB）上的氫，使其呈藍(lán)色（鹵代反應(yīng)），而高濃度的“84”消毒液呈酸性，可使TMB呈。
由此可見(jiàn)，當(dāng)“84”消毒液在空氣中的濃度大于0.001%時(shí)，即可對(duì)ELISA法的顯色造成影響，使結(jié)果為假陽(yáng)性。因此我們認(rèn)為，“84”消毒液可對(duì)ELISA法所有以TMB做底物的試驗(yàn)有影響。為找到有效的解決假陽(yáng)性的辦法，我們打開(kāi)門窗、換氣扇，工作人員的手和衣物均不接觸“84”消毒液，再把所有的標(biāo)本重新洗滌5次，加上顯色劑，除弱陽(yáng)性標(biāo)本外，其余均與未被干擾結(jié)果相符。故被“84”消毒液影響的標(biāo)本均應(yīng)重做，以免影響結(jié)果。
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