在ELISA試劑盒中通常有3次加樣步聚，即加標本，加酶聯絡物，加底物。加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留心不可濺起，不可發生氣泡。加標本通常用微量加樣器，按規矩的量參加板孔中。每次加標本應更換吸嘴，防止發作交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。
在處理和保存方面ELISA試劑盒要考慮以下幾個方面：
1.要注意防止呈現嚴峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有相似過氧化物的活性，因此，在以HRP為符號酶的ELISA試劑盒測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相，從而與后邊加入的HRP底物反響顯色。
2.血清標本如是以無菌操作別離，則能夠在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長期保存，應在-70℃以下。
3.冰凍保存的血清標本須注意防止因停電等形成的重復凍融。標本的重復凍融所發生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發生破壞效果，ELISA試劑盒從而引起假陰性成果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振動，重復倒置混勻即可。
4.樣本的采集及血清別離中要注意盡量防止菌污染，一則菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發生分化效果;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作符號的測定辦法發生非特異性干擾。
5.標本在保存中如呈現細菌污染所造成的的混濁或絮狀物時，應離心沉積后取上清檢測。
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